DMEM培養基成分分析實驗步驟

　　DMEM培養基成分分析實驗步驟
　　DMEM培養基是一種含各種氨基酸和葡萄糖的培養基,分為高糖和低糖,碳酸氫鈉緩沖體系.是在Eagle MEM基礎上增加了各成分的用量(加倍),葡萄糖可以選擇低糖(1000mg/L)和高糖(4500mg/L),對于生長速度快,附著性差的腫瘤細胞生長有利.特別在附著性較差,但又不希望它脫離原來生長點的克隆培養時,采用高糖濃度的培養基效果較好,常用于雜交瘤技術中骨髓細胞和DNA轉染的轉化細胞培養以及疫苗生產和各種初代病毒宿主細胞的細胞培養及單一細胞培養.高糖型有利于細胞停泊于一個位置生長,適于生長較快、附著較困難腫瘤細胞等.
　　改良的DMEM培養基是為小鼠成纖維細胞設計的,現在常用于貼壁細胞的培養.DMEM的氨基酸濃度是MEM的兩倍,維生素濃度是MEM的4倍,采用雙倍的HCO3-和CO2濃度起到更好的緩沖作用.
　　DMEM培養基成分分析實驗步驟:
　　1、取清洗干凈的500mL大燒杯一個,加入新鮮制備的三蒸水約300mL,加熱至15~30℃;
　　2、將DMEM干粉袋豎立輕彈,使袋中粉下沉,剪開袋口,將干粉倒入500mL的大燒杯中,用超純水沖洗袋2~3次;
　　3、放入清洗干凈的磁子,在磁力攪拌器充分攪拌,以確保培養基干粉充分溶解;
　　4、根據配方要求,加入準確稱取的NaHCO31.85g,L-谷氨酰胺0.1g,充分搖勻至*溶解;
　　5、加入已經制備好的雙抗溶液,使青霉素和鏈霉素的使用濃度達到100ug/mL;加入培養基總體積約10%的已滅活的小牛血清;
　　6、用濃度為7.4%的NaHCO3溶液調整溶液的pH值為7.2~7.4,加超純水定容,并將培養液轉入鹽水瓶;用一次性濾器過濾上述培養液到滅菌的鹽水瓶,封口,4℃保存備用.